Fagocytární aktivita neutrofilů pupečníkové a periferní krve

Abstract

Předmětem této bakalářské práce je shrnutí informací o neutrofilech jako o heterogenní buněčné populaci s mnoha funkcemi se zaměřením na popis nově popsaných subpopulací. Hlavní cílem je porovnání fagocytární aktivity neutrofilů v pupečníkové krvi novorozence a v periferní krvi matky a zdravých netěhotných dárkyň. Teoretická část shrnuje aktuální poznatky o neutrofilech, jejich jednotlivých subpopulacích včetně jejich funkčních vlastností v imunitní obraně lidského organismu. Diskutován je i stručný popis rozdílu mezi neutrofily v pupečníkové krvi novorozenců a periferní krvi dospělých jedinců. Dále se zde popisuje princip fagocytózy, která je nedílnou součástí antimikrobiální aktivity neutrofilů. Rozebírám samotný mechanismus fagocytózy a roli receptorů, které fagocyty používají na rozpoznávání infekčního agens. Jako poslední kapitolu uvádím NETózu, která je poměrně nově objevenou funkcí pozorovanou u neutrofilů. Opět popisuji mechanismus a dva typy NETózy - vitální a suicidální. V praktické části popisuji odebraný materiál, reagencie, přístroje a metody, které byly použity na měření fagocytární aktivity neutrofilů. Bylo zjištěno, že protisrážlivé činidlo K2EDTA inhibuje vápníkovou signalizaci neutrofilů. Neutrofily v tomto protisrážlivém činidle vykazovaly podstatně nižší schopnost fagocytózy. Naopak protisrážlivé činidlo heparin zachovává metabolickou aktivitu neutrofilů a nemá vliv na jejich fagocytózu. Proto se hodnoty fagocytárního indexu pohybují v kladných hodnotách při použití heparinu.

The aim of this bachelor thesis is a summary of knowledge about neutrophils as a heterogeneous population of cells with several functions with special focus on the description of recently described neutrophil subpopulations. The main aim is the comparison of phagocytic activity of neutrophils in umbilical cord blood of newborn and peripheral blood of the mothers and non-pregnant healthy women donors. The theoretical part summarizes current knowledge of neutrophils, their particular subpopulations including their functional characteristics in the immune defense of the human body. It also focuses on a brief description of the difference between neutrophils in cord and peripheral blood. Furthermore, the principle of phagocytosis as an integral part of antimicrobial activity of neutrophils is described here. The mechanism of phagocytosis itself and the role of receptors that phagocytes use to recognize an infectious agent is introduced. I am presenting NETosis that has been discovered in neutrophils recently in the last chapter. The mechanism and two types of NETosis are described - vital and suicidal. In the practical part the collected material, reagents, instruments and methods that were used to measure the phagocytic activity of neutrophils are described. I was ascertained the anticoagulant agent K2EDTA inhibits calcium signaling of neutrophils, therefore neutrophils collected in tubes with K2EDTA exerted substantially lower phagocytic capacity. In contrast, the anticoagulant agent heparin is preserves metabolic activity of neutrophils and has no effect on neutrophil phagocytosis. Therefore, values of phagocytic index are in the positive values when heparin was used.