Vliv kmenů Escherichia coli na genovou expresi cytokinů v buněčné linii makrofágů THP1

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá vlivem probiotických, nepatogenních a patogenních kmenů Escherichia coli na genovou expresi cytokinů v buněčné linii makrofágů THP1. V teoretické části jsou popsány probiotické bakterie, a to hlavně bakterie E. coli Nissle a E. coli O83. E. coli Nissle je obsažena v přípravku Mutaflor a E. coli O83 se nachází v přípravku Colinfant Newborn, který se používá pro kolonizaci novorozenců. Dále jsou zde definovány makrofágy a jimi produkované cytokiny, stejně jako jejich funkce. Praktická část se zabývá buněčnými kultivacemi, při kterých se stimulují makrofágy pomocí kmenů E. coli Nissle (EcN), E. coli O83:K24:H31 (E. coli O83), E. coli O142:K86(B):H6 (E. coli O142) a E. coli ATCC9637 (E. coli W). Po stimulaci makrofágů byla změřena genová exprese cytokinů (IL-1?, IL-6, IL-10, IL-12A, TNF-?) a Indolamin 2,3-dioxygenáza (IDO) pomocí kvantitativní PCR v reálném čase. Z výsledků práce je zřejmé, že kmeny E. coli (Nissle, O83, O142 a W) neovlivňují makrofágy THP1 ke zvýšené genové expresi u žádného pozorovaného cytokinu ani IDO v našem experimentálním uspořádání. Výsledky práce ukazují rozdílný vliv probiotických kmenů E. coli Nissle a E. coli O83 na genovou expresi cytokinů IL-6, TNF-? a IDO. Praktická část práce slouží pro lepší pochopení mechanismů prospěšného působení probiotických kmenů.

This bachelor thesis deals with the effect of probiotic, nonpathogenic and pathogenic strains of Escherichia coli on the gene expression of cytokines in the cell line of macrophages THP1. The theoretic part describes the probiotic bacteria, mainly E. coli Nissle and E. coli O83 bacteria. E. coli Nissle is contained within the Mutaflor preparation and E. coli O83 can be found in the product called Colinfant Newborn used for colonisation of newborns. Furthermore, there macrophages are defined together with cytokines they produce as well as their functions. The practical part focuses on cell culture of macrophages and their stimulation by strains of E. coli Nissle (EcN), E. coli O83:K24:H31 (E. coli O83) , E. coli O142:K86(B):H6 (E. coli O142) and E. coli ATCC9637 (E. coli W). After macrophage stimulation, the gene expression of cytokines (IL-1?, IL-6, IL-10, IL-12A, TNF-?) and Indoleamine 2,3-dioxygenase was measured using the quantitative real-time PCR. The results show that E. coli stains (Nissle, O83, O142 and W) do not change gene expression of any tested cytokines and IDO in our experimental setup. The results point out different effect of probiotic strains of E. coli Nissle and E. coli O83 on the gene expression of cytokines IL-6, TNF-? a IDO. The practical part contributes to better understanding of the mechanisms of beneficial effect of the probiotic strains.