Příprava proteinových monokrystalů pro elektronovou difrakci

Abstract

Využití elektronové krystalografie ve strukturní biologii postupně roste díky vlastnostem elektronů, jako je silná interakce s hmotou a záporný náboj. S využitím těchto vlastností je pak snazší určit polohu iontů než při rentgenové strukturní analýze nebo studovat krystaly velmi malých rozměrů. Postupy přípravy vzorků proteinových krystalů pro elektronovou difrakci i následné zpracování difrakčních dat se postupně standardizují. Tato práce se zabývá přípravou mikrokrystalů dvou vybraných proteinů, thaumatinu a mutantu bilirubin oxidázy, změnou již známých krystalizačních podmínek a následnou detekcí těchto mikrokrystalů pomocí technologie SONICC.

The use of electron crystallography in structural biology is gradually increasing due to the properties of electrons such as strong interaction with matter and negative charge. Using these properties, it is then easier to determine the position of ions than in X-ray structural analysis or to study crystals of very small dimensions. Procedures for the preparation of protein crystal samples for electron diffraction as well as the subsequent processing of diffraction data are gradually being standardized. This work deals with the preparation of microcrystals of two selected proteins, thaumatin and a bilirubin oxidase mutant, by changing already known crystallization conditions and the subsequent detection of these microcrystals using SONICC technology.