Metody genetického inženýrství pro mapování genů, které určují rozdíly ve velikosti orgánů

Abstract

Tato práce se věnuje metodám genetického inženýrství pro mapování genů, které kontrolují velikost sleziny a lymfatických uzlin. Teoreticky a prakticky jsem zvládl metody mapování genů a metody pro určení fenotypu. Konkrétně jde o izolaci DNA, DNA typizaci a určení počtu buněk v lymfatických uzlinách. Metody izolace DNA a DNA typizace (PCR, elektroforéza) byly použity prootypizování 172 neinfikovaných myší F2 kříženců OcB-43xO20 a O20xOcB-43. Použil jsem dva markery D2Mit37 a D3Mit51. Rekombinantní kongenní kmen OcB-43 nese 6,25% genomu kmene B10.O20 a 93,75% genomu kmene O20. Kmen B10.O20 je zaznamenán jako vnímavý a kmen O20 jako rezistentní vůči infekci parazitem Leishmania major. Počet buněk v lymfatických uzlinách jsem určil pomocí přístroje Beckman Coulter Z2. Tuto metodu jsem porovnal s metodou počítání buněk v Bürkerově komůrce s využitím světelného mikroskopu. Pro srovnání těchto metod jsem počítal buňky ve vzorcích myších slezin. Statistické vyhodnocení genetického vlivu na velikost sleziny a lymfatických uzlin bylo vyhodnoceno testem ANOVA. Do analýzy bylo zařazeno 104 neinfikovaných myší F2 kříženců. Byla nalezena vazba kontrolující počet buněk v lymfatických uzlinách, která je ovlivněna interakcí lokusů na chromosomu 5 a chromosomu 15. Dále byla nalezena předpokládáná vazba kontrolující počet buněk v lymfatických uzlinách, která je ovlivněna interakcí lokusů na chromosomu 2 a chromosomu 15.

Topic of this bachelor thesis is methods of the genetic engineering for mapping of the genes that control weight of spleen and lymph nodes. I have both theoretically and practically managed to deal with the methods of the genetic engineering for mapping of the genes and the methods for the determination of the fenotype. Specifically, DNA isolation, DNA typing and determining the number of cells in the lymph nodes. The methods of the DNA isolation and DNA typing (PCR, elektrophoresis) were used to type 172 uninfected mice F2 hybrids OcB-43xO20 and O20xOcB-43. I used two markers D2Mit37 and D3Mit51. The recombinant congenic strain OcB-43 carries 6,25% of genome of strain B10.O20 and 93,75% of genome of strain O20. The strain B10.O20 is recorded as sensitive and the strain O20 as resistant to infection by the parasite Leishmania major. For the determining the number of cells in the lymph nodes I used the instrument Beckman Coulter Z2. I compared this method with the method of light microscopy and Bürker chamber. I counted the cells in mice spleens for comparing these methods. The statistical evaluation of the genetic influence on the size of the spleen and lymph nodes was assessed by ANOVA test. The analysis included 104 uninfected mice F2 hybrids. There was found a linkage controlling the number of cells in the lymph nodes, which is influenced by the interaction of loci on chromosome 5 and chromosome 15. There was also found the expected link controlling the number of cells in the lymph nodes, which is influenced by the interaction of loci on chromosome 2 and chromosome 15