Vliv manumycinu A na změnu genové exprese cytokinů v mononukleární frakci leukocytů pupečníkové krve

Abstract

Téma bakalářské práce pojednává o různých kmenech bakterií z rodu Streptomyces, jejich sekundárních metabolitech a imunomodulačních vlastnostech těchto metabolitů. Bakalářská práce se zaměřuje především na produkty, které se v klinické praxi již nyní používají, nebo jsou ve stádiu výzkumu a mají pro použití ve zdravotnictví potenciál. Dále se teoretická část práce zabývá cytokiny. Nejprve je popsána jejich obecná funkce, vlastnosti a rozdělení. Následně se specificky věnuje vybraným cytokinům, které jsou studovány v praktické části bakalářské práce. Poslední část teoretické části bakalářské práce popisuje jednotlivé typy leukocytů mononukleární frakce a jejich úlohu v imunitním systému organismu. Praktická část bakalářské práce popisuje přesné postupy laboratorní práce, použité reagencie, materiály a přístroje nezbytné ke stanovení změny genové exprese cytokinů. Vlastní experimentální část bakalářské práce se věnuje vlivu různých koncentrací manumycinu A na změnu genové exprese cytokinů v leukocytech mononukleární frakce pupečníkové krve. Konkrétně se jedná o cytokiny Il1b, Il4, Il6, Il10, Tnfa a Ifng. Manumycin A patří mezi sekundární metabolity produkované bakteriemi rodu Streptomyces. Získané výsledky ukázaly, že u většiny sledovaných cytokinů nedošlo k signifikantní změně genové exprese po přidání různých koncentrací manumycinu A na rozdíl od našeho předpokladu. Námi sledované prozánětlivé cytokiny nebyly přítomností manumycinu A ovlivněny, ovšem určité cytokiny charakteristické pro T buněčnou populaci leukocytů vykazovaly jisté efekty různých přidaných koncentrací manumycinu A. Zdá se, že manumycin A nemá až tak velké účinky na změnu genové exprese cytokinů mononukleární frakce buněk pupečníkové krve, jak jsme předpokládali na základě předchozích dat získaných z buněčných linií. Získané výsledky bude třeba ověřit na mononukleární frakci leukocytů izolovaných z periferní krve dospělých dárců s využitím polyklonálního stimulátoru fytohematoglutininu.

The topic of the bachelor thesis deals with different strains of from the bacterial genus Streptomyces, their secondary metabolites, and the immunomodulatory properties of these metabolites. Bachelor thesis focuses mainly on products that are already used in clinical practice or are in the research stage and have the potential to be used in health care. Further, the theoretical section focuses on cytokines. First, general function of cytokines is described, their characteristics, and classification. Subsequently, the thesis focus specifically on selected cytokines which are studied in the practical part of the bachelor thesis. The last part of the theoretical part of the bachelor thesis describes the particular types of leukocytes of the mononuclear fraction and their role in the immune system of organism. The practical part of the bachelor thesis describes the exact procedures of laboratory work, the reagents used, the materials and instruments necessary to determine the change in gene expression of cytokines. The own experimental part of the bachelor thesis is devoted to the effect of different concentrations of manumycin A on the alteration of gene expression of cytokines in leukocytes of the mononuclear fraction of cord blood. Specifically, Il1b, Il4, Il6, Il10, Tnfa and Ifng were investigated. Manumycin A belong to secondary metabolites produced by bacteria of genus Streptomyces. The results obtained showed that gene expression of the majority of studied cytokines was not significantly changed after the addition of different concentrations of manumycin A, contrary to our assumption. The pro-inflammatory cytokines, we investigated, were unaffected by the presence of manumycin A, however certain cytokines characteristic for the T cell population of leukocytes showed some effects of different added concentrations of manumycin A. It seems, manumycin A does not have as strong effect on altering the gene expression of cytokines in the mononuclear fraction of cells of cord blood as we thought based on previous data obtained from cell lines. Obtained results will have to be confirmed using mononuclear fraction of leukocytes isolated from peripheral blood of adult volunteers with utilization of phytohametoglutinin as a polyclonal stimulator.